ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析ELISA试剂盒操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法。
目前用于纺织退浆的淀粉酶主要ELISA试剂盒，淀粉糖化酶（β-淀粉酶），胰淀粉酶，麦芽淀粉酶等。我国主要采用耐热性强的枯草杆菌淀粉酶即α-淀粉酶（枯草杆菌），β淀粉酶属于一种细菌淀粉酶是由地衣芽孢杆菌经液体深层发酵，提取等工序精制而成的浅褐色液体生物制剂，广泛应用于啤酒等生产中。它对温度有较强的适应能力。它并非为单一为单一淀粉酶，还含有其它酶组分。后者含量较少，但它们的存在有利于去除织物上的油脂，蛋白质等杂质。
实验显示，ELISA试剂盒经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或*没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显着的增多，人正常肝细胞这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，人白介素ELISA试剂盒而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
ELISA试剂盒于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物。微生物的酶几乎都是分泌性的。此酶以Ca2+为必需因子并作为稳定因子和激活因子，也有部分淀粉酶为非Ca2+依赖型。淀粉酶既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地随机切断糖链内部的α－1，4-链。因此，其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失，zui终产物在分解直链淀粉时以葡萄糖为主，此外，还有少量麦芽三糖及麦芽糖，其中真菌a-淀粉酶水解淀粉的终产物主要以麦芽糖为主且不含大分子极限糊精，在烘焙业和麦芽糖制造业具有广泛的应用。另一方面在分解支链淀粉时，除麦芽糖、葡萄糖、麦芽三糖外，还生成分支部分具有α-1，6-键的α-极限糊精（又称α-糊精）。一般分解限度以葡萄糖为准是35-50%，但在细菌的淀粉酶中，亦有呈现高达70%分解限度的（zui终游离出葡萄糖）；
一、选择试剂
选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
二、加样
大鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒可能原因：
1）血清或血浆标本分离不好即进行加样；
2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）；
3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
大鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒解决办法：
1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。
2） 加样后及时放入孵箱。
3） 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4） 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5） 标本较多时，请分批操作。
常见ELISA试剂盒实验技术要点，不看就没了！
我公司技术专员对解析出其实验技术要点，下面一起来看看吧。
1. 准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等；
2. 根据检测标本数量确定所需试剂的量；
3. 按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂；
4. 标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备，尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存。
实验中为了确定*佳信号和*背景应将捕获抗体（0.5-4μg/ml）和检测抗体（0.25-2μg/ml）在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。
一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
为了优化灵敏度，建议过夜孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig。
扫一扫，关注微信
当前位置：