核糖核酸酶采用的技术指导工作

 

　　核糖核酸酶特点：

 

　　1. 特异性强：只对肿瘤细胞进行有效识别和杀灭，而不伤害正常组织和细胞,抗瘤谱广。

 

　　2. 对体内各种肿瘤细胞均能有效治疗。

 

　　3.安全性好，除可能出现的发热、少量出血外，无其他不良反应

 

　　4.本产品具有良好的增殖和分化潜能，可分化为骨细胞，脂肪细胞，软骨细胞等，流式检测结果显示，CD29，CD44，CD105阳性，CD35，CD45阳性

 

　　核糖核酸酶传代说明：

 

　　(一)如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

 

　　(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养，具体步骤如下：

 

　　1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

 

　　2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量*培养基终止消化。

 

　　3. 按6-8ml/瓶补加*培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的*次传代一般是一传二。

 

　　细胞经过严格的控制（从组织来源、实验室条件等方面），人正常肝细胞；L-02纯度可达98％。不同的细胞传代次数不一。多数细胞种类是从胚胎提取，于原代（或二代）冻存在液氮中。细胞采用干冰运输，客户收到细胞后，从干冰中取出放入液氮中保存，待实验安排好后，解冻后即可以进行复苏培养。公司实验室的细胞、培养基都是经过严格检验，分离、配制而成，产品质量过硬。

 

　　运输与保存：本品使用10%DMSO冻存液冷冻，采用干冰保存运输，收到细胞后，如果不立即复苏，请将细胞放入液L-02人正常肝细胞；L-02复苏方法：取出冻存管后，投入37 ℃水浴中，震荡解冻2 min，酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入5 ml 37 ℃预热的培养基，并清洗冻存管一次，将离心管离心（1000 rpm，5 min），弃去上清液，再加入2 ml培养基，转入培养瓶中培养。核糖核酸酶虽然有些粘蛋白是膜 -被结合由于存在疏水性有利于保持在跨膜域质膜，大多数粘蛋白被分泌到粘膜表面或分泌成为一个组件唾液。

 

　　在核糖核酸酶中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

 

　　1、固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

 

　　2、包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。

 

　　3、酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接核糖核酸酶9001-99-4法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。